自从1942年3月仰光沦陷直到1945年史迪威公路开通之前，中国通往外部世界的道路已基本上中断。如何将抗战所需的大批物资、弹药运进中国成为当务之急。早在1942年10月8日，陈纳德在写给美国总统特使温德尔·威尔基的信件中，就提出开通"驼峰航线"的建议。从昆明经缅甸到印度的航线上，山峰连绵起伏，有如驼峰，因此人们称之为"驼峰航线"。未标明海拔高度的山峰，难以预料的雷暴以及日机的出没，均对运输机构成巨大的威胁。

第一次试飞时，陈纳德以昆明巫家坝机场作为其指挥所。一架C—46运输机在他的指挥下，越过千年积雪的山峰，绕过积雨区，安全抵达印度的利多机场。此后，陈纳德又试图从云南经青藏高原，直飞印度。这条航线上有海拔4500—5000米的高山，空气稀薄，气候恶劣，又有强烈的紫外线照射。美国王牌飞行员福克斯上校被召至中国。他曾试飞过许多新型飞机，并开辟过多条新航线。但这一次他却没那么幸运。起飞后一个多小时，福克斯驾驶的C—46飞机在恶劣的气候中一头撞到了山峰上，不幸殉难。此后，经过中美双方的共同努力及飞行员前赴后继的试飞，C—46飞机的缺陷被逐渐消除，驼峰航线也变得安全起来。在3年多的驼峰航线运输中，空运指挥部共向中国运送了736374吨物资，但损失了468架运输机，有1579名美国飞行员英勇捐躯。

飞虎队与驼峰航线的命运息息相关，他们不仅是这条航线的保护者，也是这条航线的受益者，因为飞虎队所需的战略物资要由驼峰航线补给。在保卫这条航线上，飞虎队也屡建战功。

1943年4月27日，日机27架再犯驼峰航线，飞虎队在滇西上空与之交战，一举击落日机10架。

1943年10月29日，飞虎队在滇西上空与日机交战，击落日机14架，击伤11架。

1943年12月21日，飞虎队与日机再次在昆明上空交战，击落日机20架，击伤31架。